京都大学Shin Kaneko教授团队利用CRISPR/Cas9基因编辑开发了一种低免疫原性的同种异体诱导多能干细胞（iPSC）来源T细胞疗法，该研究成果于近日发表在Nature Biomedical Engineering上。

一个用于肿瘤免疫治疗的理想T细胞产品，除了需必备抗原特异性效应功能外，还应具有以下特征：

1. 没有针对宿主正常细胞不必要的效应功能，以避免移植物抗宿主反应（GVHD）；

2. 具有宿主可接受的抗原性水平，以阻止免疫排斥；

3. 含有大量的初始T细胞和TSCM细胞，以确保足够的T细胞扩增和持久性。

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然而，很难从同种异体供体T细胞中生成此类T细胞。删除同种异体因子和激活细胞毒性免疫细胞的因子，是保护T细胞移植物免受免疫排斥的一种可行的解决方案，但是对T细胞（尤其是使用原代T细胞）多次进行基因组编辑通常需要多步重复操作（包括多次循环进行T细胞扩增），这可能会导致最终T细胞产物的衰竭和功能丧失。

iPSC细胞具有无限扩增潜力，可以分化为任何细胞类型，包括用于过继细胞免疫疗法的T细胞。重要的是，它们的扩增和分化潜力都不受多次基因编辑的影响。因此，将iPSC应用于同种异体T细胞疗法的开发具有巨大潜力。

不过应该对哪些基因加以编辑来避免移植T细胞的免疫排斥呢？Shin Kaneko教授表示：“为了使移植物存活，需要抑制3类免疫细胞。其中，CD8 T细胞引起最强烈和最危险的反应，此外，CD4 T细胞和NK细胞也必须加以考虑。” 

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已有研究表明，表达HLA-I的野生型iPS-T会引起同种异体CD8 T细胞的免疫反应，因此，该研究中利用CRISPR/Cas9敲除了构建HLA-I分子的关键基因B2M（下图1）。对于CD4 T细胞由HLA-II介导不必要的激活反应，则选择敲除了CIITA基因（下图2）。为减少NK细胞的“自我攻击”（missing-self attack），选择了转导NK细胞抑制性配体HLA-E，并敲除NK细胞激活性配体PVR（下图3和4）。

此外，Shin Kaneko教授团队还将嵌合抗原受体 (CAR) 技术整合到经过一系列基因编辑的iPS-T细胞中，并在白血病或淋巴瘤小鼠模型中进行了测试。

研究表明基因编辑不会损害CAR的有效性，相比于没有经过基因编辑的细胞，改造过的低免疫原性CAR iPS-T细胞显示出更强的抗癌效果。

总体而言，避免移植T细胞的免疫排斥是同种异体肿瘤免疫疗法成功的关键。这项研究证明了通过敲除iPSC中HLA-I（B2M）、HLA-II基因（CIITA）和NK细胞激活性配体（PVR），并敲入NK细胞抑制性配体（HLA-E）所获得的同种异体多能干细胞，是作为同种异体T细胞疗法来源的一种潜在策略。